PCR教学试剂盒
Cat. #：P8021，P8022
产品简介
本试剂盒是按照教学实验内容设计的，符合标准扩增流程的，教学用PCR反应试剂盒。本试剂盒所提供的模板为插入特定大小DNA片段的PBluescipt SK（+）重组质粒；引物为根据所插入DNA序列和扩增片段大小不同设计的上下游引物。PCR结果可获得特定大小（500 bp或1,000 bp）的PCR产物。
产品组成
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Component |
P8021 （500 bp，30次） |
P8022 （1,000 bp，30次） |
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DNA模板 |
150 μl，500 bp |
150 μl，1,000 bp |
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上游引物 (10 μM) |
75 μl |
75 μl |
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下游引物(10 μM) |
75 μl |
75 μl |
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dNTP混合物(2.5 mM) |
150 μl |
150 μl |
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Taq DNA聚合酶(2.5 U/μl) |
40 μl |
40 μl |
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10×PCR缓冲液 |
500 μl |
500 μl |
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超纯水 |
1 ml |
1 ml |
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说明书 |
1份 |
1份 |
活性定义
一个活性单位（U）指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在72℃、30 min内，摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。
保存条件
10×PCR缓冲液保存于4℃，其他成分-20℃保存。
质量控制
纯度检测：经质量检测，产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。
功能检测：PCR方法检测本试剂盒无宿主残余DNA，也无其他DNA污染，能有效完成PCR扩增。
应用举例
1. 配制反应体系
请于冰上配置反应体系，体系大小与组分用量与添加顺序可调整：
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Ordinal |
Component |
Volume (25 μl reaction volume) |
Volume (50 μl reaction volume) |
Volume (50 μl reaction volume，n管) |
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1 |
10×PCR缓冲液（Mg2+ Plus） |
2.5 μl |
5 μl |
5×(n+1) μl |
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2 |
dNTPs（2.5mM） |
2 μl |
4 μl |
4×(n+1) μl |
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3 |
上游引物 (10 μM) |
1 μl |
2 μl |
2×(n+1) μl或a μl×(n+1) |
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4 |
下游引物 (10 μM) |
1 μl |
2 μl |
2×(n+1) μl或a μl×(n+1) |
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5 |
Taq DNA聚合酶（2.5U/μl） |
0.5 μl |
1 μl |
1×(n+1) μl或a μl×(n+1) |
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6 |
template DNA |
2 μl |
4 μl |
4×(n+1) μl或a μl×(n+1) |
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7 |
超纯水 |
16 μl |
32 μl |
32×(n+1) μl |
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8 |
石蜡油 |
如不能设置顶盖温度，需适量加入石蜡油。 |
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● 加入各组分后，请用枪头反复吸吹几次，充分混匀。
● 在一次配制多管需分装时建议按（n+1）的反应液量配制，以确保分配时的耗损不会影响实验，同时选择大于总体积的离心管便于混匀。
● 如需使用其他体积的PCR反应体系，请按各组分比例缩减或增加各组分用量。
● 组分中引物、DNA模板、Taq DNA聚合酶常用于梯度实验，如有调整，请注意调超纯水的用量至相应的体系。
● 将混匀的各管短暂离心，置于PCR仪中。
2. 设定反应程序进行PCR反应
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Stage |
Temperature |
Time |
Number of Cycles |
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Initial Denaturation |
94℃ |
3 min |
1 |
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Denaturation |
94℃ |
30 sec |
30 |
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Annealing |
55℃ |
30 sec |
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Extension |
72℃ |
30 sec or 45 sec |
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Final Extension |
72℃ |
5 min |
1 |
● 设定PCR程序时，请根据目的片段大小决定延伸时间，如果目的片段大小为500 bp时，延伸时间为30 sec，目的片段为1 kb时，延伸时间为45 sec。
3. 分析结果
反应结束后取2-5 μl反应产物与loading buffer混匀后进行琼脂糖凝胶电泳，通过凝胶成像设备观察目的条带的扩增情况。
● 500 bp产物建议电泳条件为1.7%琼脂糖凝胶，0.5×TBE，7 V/cm，20-40 min，建议Marker为 DSTM 2000（M1101）。
● 1 kb产物建议电泳条件为1.0%琼脂糖凝胶，1×TAE，7 V/cm，20-40 min，建议Marker为 DSTM 5000（M1111）。
注意事项
请严格按照说明书提供的实验体系及实验条件进行试验。
室温下Taq DNA聚合酶有一定的活性，为避免发生非特异性扩增，请于冰上配置反应体系，并且最后添加Taq DNA聚合酶或模板DNA。
挑取菌落时，应选择单菌落，不要挑取太多菌体，以免影响PCR结果。