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Multiplex Probe qPCR Mix Plus U (Low ROX+)

 预混低浓度ROX、含UDG防污染系统的探针法多重qPCR预混液

货号规格

产品简介

Multiplex Probe qPCR Mix Plus U (Low ROX+)是用于探针法实时定量PCR的2×浓缩预混液，使用时只需加入模板、引物和探针即可进行反应。本品含有抗体技术修饰的热启动酶Hotstart Taq DNA聚合酶，配合东盛特制的Real Time PCR Buffer，不仅有效抑制引物二聚体和其他非特异性扩增，而且能够提高扩增效率。该试剂引入了 dUTP/UDG 防污染系统，可以在PCR反应前清除含dUTP的PCR产物，有效避免因扩增产物的交叉污染对定量的影响。本品方便用于搭配TaqMan、引物实现全预混Master Mix分子诊断试剂盒，与常见定量PCR仪完美兼容，如ABI、Roche、Bio-Rad等。本品已预混了低浓度ROX参比染料，适用于ABI、Roche等需要低浓度ROX校正的荧光定量PCR仪，可搭配TaqMan等各类荧光探针使用。本产品可以免冰盒配制反应体系，可以直接于常温进行PCR Mix、引物、模板等组分的配制，配制好的PCR反应体系可以常温放置24小时而保持扩增效率不变。

产品用途

探针法基因表达分析

多重低拷贝基因检测

产品特点

可进行多重探针法荧光定量PCR

适合需要低浓度ROX校正的机型

高效热启动技术带来高特异和可重复的扩增

含 dUTP/UDG 防污染系统

稳定性高，适合大规模检测

桌面稳定性测试 (P2701，不含ROX)：

以人基因组DNA（0.1ng/µl）为模板，通过Multiplex Probe qPCR Mix Plus U (P2701)进行基因检测。图1、图2分别是在反应体系配制完成后（0 hr）和室温（25℃）放置48小时后（48 hr）进行检测的扩增曲线；同时与厂家T同类产品进行对比测试，图3、图4分别是厂家T装配完成0 hr和48 hr的扩增曲线。表2展示Multiplex Probe qPCR Mix Plus U和厂家T在0 hr和48 hr的Ct值。可以看出，预装配体系室温放置48小时后Multiplex Probe qPCR Mix Plus U依然具有优秀的扩增表现。

图1: P2701-0hr; 图2: P2701-48hr

图3: supplier T-0hr; 图4: supplier T-48hr

表1，Ct值统计

快速扩增测试 (P2701，不含ROX)：

Multiplex Probe qPCR Mix Plus U支持快速扩增模式，反应时间<50min，时间节省>30%，Ct损失可控：~1-3.5 cycles。

高浓度污染清除测试 (P2701，不含ROX)：

在三重（3-Plex）荧光扩增体系中 ，特意引入10^4倍稀释（浓度100a）、10^5倍稀释（浓度10a）及10^6倍稀释（浓度a）的含 U 扩增产物模拟实验室污染，对比未引入UDG防污染系统的 P2601 与本品 P2701 的抗污染表现，同时进行了NTC对照测试。
结果：
P2601（无防污染对照组）：NTC组无起跳，受污染通道（GAPDH / RPLPO / GUSB）在各稀释梯度下均强烈起跳，假阳性极其严重。
P2701（本品测试组）：经 37℃ 消化2 min后，受污染通道（GAPDH / GUSB）的假阳性信号被有效清除（检出限以下），扩增曲线恢复至基线水平。RPLPO检测Ct 值显著后移（ΔCt~11），清除效率高达99.95%。NTC组无起跳。

不同浓度含U模板的扩增曲线图

不同浓度含U模板的qPCR Ct值对比图

产品组成

a 包含 Hotstart Taq DNA 聚合酶，dNTP/dUTP Mix，UDG（Uracil-DNA Glycosylase，尿嘧啶 DNA 糖基化 酶）及反应缓冲液等。

保存条件

-20℃保存 2 年，4℃可短期保存。